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TSKgel Chelate-5PW色(se)譜(pu)柱008646
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TSKgel Chelate-5PW色(se)譜(pu)柱是將亞(ya)氨基(ji)二乙(yi)酸(IDA)基團共(gong)價鍵合到G5000PW聚合物基(ji)質(zhi)上(shang)。在(zai)親(qin)和色(se)譜(pu)之(zhi)前(qian)將金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)例(li)如(ru)Zn2+、Ni2+或(huo)Cu2+,螯(ao)合到IDA基團(tuan)上,金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)結(jie)合在(zai)IDA基(ji)團上(shang)的三個配(pei)位(wei)點(dian)。因(yin)此(ci),目標分子可以(yi)緊(jin)密(mi)地結(jie)合在(zai)金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)的(de)三個遊(you)離(li)結合位(wei)點(dian)。由於結(jie)合的(de)金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)濃(nong)度很(hen)高(每(mei)mL凝膠(jiao)為(wei)20μmol金屬(shu)離(li)子(zi)),TSKgel Chelate-5PW色(se)譜(pu)柱對於目標分子有(you)很高的(de)結合力(li)。
肽(tai)和蛋(dan)白質(zhi)中的組(zu)-氨酸殘(can)基(ji)在(zai)中性(xing)pH條件下(xia)通(tong)常(chang)會吸附(fu)到這些(xie)螯(ao)合離(li)子(zi)上。使(shi)用含(han)有(you)咪唑或(huo)甘-氨酸的緩沖(chong)液(ye)進行蛋(dan)白質(zhi)解(jie)吸(xi)。成功利(li)用(yong)這(zhe)種保留(liu)機制(zhi)的(de)關鍵是選擇(ze)合適(shi)的(de)金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)和洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液(ye)。Cu2+與蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)相互(hu)作(zuo)用(yong)更加(jia)強烈(lie),Zn2+通常(chang)能(neng)提高分(fen)辨(bian)率。使(shi)用(yong)Zn2+時(shi),色(se)譜(pu)柱為(wei)飽和載量,而結(jie)合較(jiao)強的Cu2+的載量大約(yue)為(wei)總(zong)量的壹(yi)半。蛋(dan)白(bai)的洗(xi)脫(tuo)通常(chang)通過(guo)梯(ti)度增加(jia)咪唑或(huo)甘-氨酸濃度,或(huo)者梯(ti)度降(jiang)低(di)pH值來進行。甘(gan)-氨酸(HEPES緩沖液(ye)中)是壹(yi)種強洗(xi)脫(tuo)液(ye),也(ye)可以(yi)解吸金屬(shu)離(li)子(zi),因(yin)此(ci)有(you)必要(yao)在(zai)每(mei)次分析(xi)結束(shu)後對色(se)譜(pu)柱進行再(zai)生(sheng)。咪唑(磷酸鹽(yan)緩(huan)沖液(ye)中)是壹(yi)種弱洗(xi)脫(tuo)液(ye),有必要(yao)在(zai)色(se)譜(pu)柱運(yun)行(xing)多次(ci)以(yi)後再(zai)生(sheng)。

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