氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒
該產(chan)品(pin)是(shi)用(yong)於(yu) HPLC 分(fen)析(xi)的(de)氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒。由(you)於氨基酸具有(you)高親(qin)水(shui)性(xing)且(qie)紫(zi)外(wai)線(xian)吸收(shou)不足(zu)， 因此需(xu)要在 HPLC 之前(qian)標(biao)記(ji)氨基酸。近年(nian)來(lai)，D- 氨基酸受到關(guan)註， 但對(dui)於常(chang)規的(de)標(biao)記(ji)試劑(ji)， 例(li)如異硫氰酸苯(ben)酯和(he)丹酰氯(lv)， 需(xu)要昂貴的(de)手(shou)性(xing)柱來(lai)分(fen)離(li) D- 型和 L- 型。

全新(xin)專(zhuan)-利(li)產(chan)品(pin)氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒

DL-Amino Acid Labeling Kit

該產(chan)品(pin)是(shi)用(yong)於(yu) HPLC 分(fen)析(xi)的(de)氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒。由(you)於氨基酸具有(you)高親(qin)水(shui)性(xing)且(qie)紫(zi)外(wai)線(xian)吸收(shou)不足(zu)，因此需(xu)要在 HPLC 之前(qian)標(biao)記(ji)氨基酸。近年(nian)來(lai)，D- 氨基酸受到關(guan)註，但對(dui)於常(chang)規的(de)標(biao)記(ji)試劑(ji)，例(li)如異硫氰酸苯(ben)酯和(he)丹酰氯(lv)，需(xu)要昂貴的(de)手(shou)性(xing)柱來(lai)分(fen)離(li) D- 型和 L- 型。

全新(xin)專(zhuan)-利(li)產(chan)品(pin)氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒，由(you)於使(shi)用(yong)了D-FDLDA，不需(xu)要使(shi)用(yong)手性(xing)柱，用(yong) C18 柱也可實(shi)現(xian)手性(xing)分(fen)離(li)。分(fen)離(li) 19 種 DL- 氨基酸以(yi)及含有(you) Gly 的(de)氨基酸時(shi)，可(ke)以(yi)分(fen)離(li)所(suo)有(you)的(de) D- 氨基酸和(he) L- 氨基酸。

關(guan)鍵詞(ci) ：食品(pin)，代謝組(zu)學(xue)，氨基酸，多(duo)肽，蛋(dan)白(bai)質，HPLC，LC-MS，LC-MS / MS

特長(chang)

l                      操(cao)作簡(jian)單(dan)

l                      不需(xu)要使(shi)用(yong)手性(xing)柱，用(yong) C18 柱也可實(shi)現(xian)手性(xing)分(fen)離(li)

l                      與高(gao)靈敏(min)度 MS 分(fen)析(xi)兼(jian)容(rong)

l                       標(biao)記(ji)氨基酸穩定(ding)性(xing)高

LC-MS 分(fen)析(xi)例(li)

使(shi)用(yong) LC-MS 分(fen)離(li)各種 DL- 氨基酸（方(fang)法(fa) 1）

分(fen)離(li) 19 種 DL- 氨基酸以(yi)及含有(you) Gly 的(de)氨基酸時(shi)，可(ke)以(yi)分(fen)離(li)所(suo)有(you)的(de) D- 氨基酸和(he) L- 氨基酸。

分(fen)析(xi)條件：

套裝(zhuang)組成(cheng)

套裝(zhuang)組成(cheng)（100 次(ci)測(測)定(ding)用）（包括(kuo)用(yong)戶(hu)自己需(xu)要準備的(de)物(wu)料(liao)）

*1 要反應的(de)官能(neng)團總量應小(xiao)於(yu) 1.0 μmol。如果(guo)更(geng)高，則稀釋或(huo)減少樣(yang)品(pin)量。此外(wai)，在標(biao)記(ji)（衍生化(hua)）時，請(qing)把樣(yang)品(pin)溶液(ye)調成(cheng)中(zhong)性(xing)。

*2  使(shi)用(yong) (D)FDLDA 作為標(biao)記(ji)試劑(ji)。

*3 包含 6-mercapto-1-hexanol [M.W.: 134.24(C6H14OS)]。

*4  反應停(ting)止(zhi)液(ye) ：鹽酸

2種(zhong)方(fang)法(fa)

本產(chan)品(pin)中(zhong)使(shi)用(yong)的(de)標(biao)記(ji)劑 D-FDLDA 與(yu)氨基反應。 此外(wai)，酪(lao)-氨酸的(de)酚羥基、半胱(guang)-氨酸的(de)硫醇基等壹(yi)部分(fen)側(ce)鏈(lian)也被標(biao)記(ji)。 去除氨基酸側(ce)鏈(lian)的(de)標(biao)記(ji)劑（Lys 除外(wai)）見下(xia)圖(tu)藍(lan)框(kuang)部分(fen)。

*1 提前(qian)中(zhong)和(he)樣品(pin)

* 標(biao)記(ji)反應只需(xu)將試劑盒溶液(ye)加入樣品(pin)溶液(ye)並加熱(re)即可。

* 如果(guo)加(jia)入去(qu)標(biao)簽試(shi)劑後沒(mei)有(you)顏色(se)變化(hua)（黃色(se)→深(shen)橙色(se)），說(shuo)明(ming)樣(yang)品(pin)濃度(du)高(gao)，可能(neng)有(you)未被標(biao)記(ji)的(de)氨基酸，這(zhe)時(shi)請(qing)稀釋樣(yang)品(pin)，建進(jin)行(xing)標(biao)記(ji)反應。

DL-Tyr 中(zhong)的(de)標(biao)記(ji)機(ji)制

如果(guo)樣(yang)品(pin)中(zhong)所(suo)含的(de)氨基酸未知，請(qing)嘗試(shi)方(fang)法(fa) 1。

來(lai)自(zi)標(biao)記(ji)試劑(ji)的(de) HPLC 峰(feng)

強(qiang)烈(lie)建議在分(fen)析(xi)樣品(pin)之前(qian)先(xian)進行(xing)空(kong)白(bai)分(fen)析(xi)。

分(fen)析(xi)肽成(cheng)分(fen)

分(fen)析(xi)氨基酸混(hun)合(he)物

用氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒標(biao)記(ji)肽水(shui)解後檢(jian)測到的(de)氨基酸，然(ran)後(hou)使(shi)用(yong) LC-MS 分(fen)析(xi)。

※ L-(Cys)2 檢(jian)測為 L-Cys

< 分(fen)析(xi)條件 >

Column: COSMOCORE 2.6C18　2.1 mm I.D. × 100 mm

Mobile phase: A: 0.1% Formic Acid - Acetonitrile / H2O = 10 / 90

B: 0.1% Formic Acid - Acetonitrile / H2O = 50 / 50

B conc. 0 → 25 → 45 → 67%（0 → 3 → 15 → 30 min）

Flow rate: 0.4 mL/min

Temperature: 40℃

Detection: ESI(+)-MS

Inj. vol.: 1.0 µL

水(shui)解肽的(de)氨基酸分(fen)析(xi)

N 末(mo)端的(de) Val 為(wei) L 型、中(zhong)心(xin)的(de) Val 為(wei) D 型的(de)肽（H-VRVAA-NH2: LLDLL-form）在水(shui)解後，用(yong) 氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒和(he)異硫氰酸苯(ben)酯 (PITC) 對(dui)其進行(xing)標(biao)記(ji)。

用 PITC 標(biao)記(ji)時，D-Val 和(he) L-Val 的(de)峰(feng)完(wan)-全(quan)重(zhong)疊，無(wu)法(fa)識別外(wai)消(xiao)旋(xuan)化(hua)。 而(er)使(shi)用(yong)氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒進(jin)行(xing)標(biao)記(ji)後，因(yin)為(wei)可(ke)以(yi)光(guang)學(xue)分(fen)離(li)氨基酸，因(yin)此(ci)也可以(yi)用(yong)於(yu)確(que)認(ren)合成(cheng)肽有(you)無外(wai)消(xiao)旋(xuan)化(hua)。

標(biao)記(ji)試劑(ji)的(de)比(bi)較(jiao)

與傳統(tong)手性(xing)標(biao)記(ji)劑的(de)比(bi)較(jiao)

在通(tong)過(guo)非(fei)手性(xing)柱光(guang)學(xue)分(fen)離(li)氨基酸中(zhong)，基於 Marfey 方(fang)法(fa)，(L)FDAA 或(huo) (L)FDLA 的(de)標(biao)記(ji)劑是(shi)已(yi)知(zhi)的(de)，但是(shi)該產(chan)品(pin)的(de)標(biao)記(ji)劑 (D)FDLDA易(yi)於(yu)電(dian)離，因此(ci)與傳統(tong)方(fang)法(fa)相(xiang)比(bi)，MS 靈(ling)敏(min)度(du)更高，而(er) UV 靈敏(min)度(du)大(da)致相(xiang)同。由(you)於使(shi)用(yong)了 D 型標(biao)記(ji)試劑(ji)，因(yin)此(ci)洗脫(tuo)順(shun)序與常規方(fang)法(fa)相(xiang)反(fan)。

與非(fei)手性(xing)標(biao)記(ji)劑的(de)比(bi)較(jiao)

使(shi)用(yong)以(yi)下(xia)四種標(biao)記(ji)試劑(ji)進(jin)行(xing)柱前(qian)標(biao)記(ji)法(fa)比(bi)較(jiao)。

1、DL-Amino Acid Labeling Kit (#19942-74）

2、 Dabsyl Chloride (#10427-91)

3、o-Phthalaldehyde(#27810-44)

4、異硫氰酸苯(ben)酯 (PITC) * 僅(jin)標(biao)記(ji)樣品(pin)的(de)穩定(ding)性(xing)數(shu)據(ju)

● 分(fen)離(li)氨基酸 D 型和 L 型

在 C18 柱(zhu)上(shang)分(fen)析(xi)被標(biao)記(ji)的(de) DL- 苯(ben)丙(bing)-氨酸，氨基酸的(de) DL 形(xing)式(shi)不(bu)能(neng)被非(fei)手性(xing)標(biao)記(ji)劑的(de) (2) 和(he) (3) 非(fei)手性(xing)標(biao)記(ji)劑分(fen)開(kai)，但 (1) DL- 氨基酸標(biao)

記(ji)試劑(ji)盒因(yin)其標(biao)記(ji)試劑(ji)結(jie)構(gou)中(zhong)有(you)不對(dui)稱碳(tan)原(yuan)子，且(qie)氨基酸的(de) D 和(he) L 形(xing)是(shi)非(fei)對映異構體(ti)，因(yin)此能(neng)夠(gou)分(fen)離(li)。

● 質譜儀(yi)（MS）檢(jian)測靈敏度(du)

我們比較(jiao)了標(biao)記(ji)的(de) L- 苯(ben)丙(bing)-氨酸在質譜儀(yi)（MS）檢(jian)測時的(de)靈(ling)敏(min)度(du)。 DL- 氨基酸手(shou)性(xing)檢(jian)測試劑盒中(zhong)的(de)標(biao)記(ji)試劑(ji)和(he)丹磺(huang)酰氯(lv)都是(shi)易(yi)於(yu)電(dian)離(li)的(de)結(jie)構(gou)，因(yin)此(ci)在 MS 中(zhong)的(de)檢(jian)測靈敏度(du)很(hen)高。 (4) 由(you) PITC 生產(chan)的(de) PTC 氨基酸的(de)推薦流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)能(neng)用於 MS。

● 標(biao)記(ji)樣品(pin)穩定(ding)性(xing)

在反(fan)應日後(hou)第 1 天、3 天(tian)和 7 天通(tong)過(guo) HPLC 分(fen)析(xi)標(biao)記(ji)的(de) L- 苯(ben)丙(bing)-氨酸。 用(yong)鄰(lin)苯(ben)二(er)甲醛(quan)標(biao)記(ji)的(de)樣(yang)品(pin)穩定(ding)性(xing)較差(cha)，不適(shi)合手(shou)動(dong)標(biao)記(ji)，應僅(jin)限用(yong)於分(fen)析(xi)儀的(de)在線(xian)分(fen)析(xi)。 PITC 標(biao)記(ji)的(de)樣(yang)品(pin)也不太(tai)穩定(ding)。

※ 將反應後第壹(yi)天(tian)的(de)峰(feng)面(mian)積(ji)設為 100%。 PITC 標(biao)記(ji)的(de)樣(yang)品(pin)冷(leng)凍保存，其他樣(yang)品(pin)冷(leng)藏保存

定量表現(xian)

氨基酸標(biao)記(ji)反映

DL-Tyr 根(gen)據(ju)標(biao)記(ji)方(fang)法(fa)不(bu)同，標(biao)記(ji)試劑(ji)結(jie)合(he)數(shu)量不同。使(shi)用(yong) DL-Tyr 測量標(biao)記(ji)反應隨(sui)時間(jian)的(de)變化(hua)，結果(guo)表明(ming)，氨基酸在開(kai)始(shi) 2 小(xiao)時(shi)內被完(wan)-全(quan)標(biao)記(ji)。

標(biao)記(ji)的(de)後(hou) DL- 氨基酸的(de) DL 體(ti)比(bi)率(lv)

標(biao)記(ji) 2 小(xiao)時(shi)後(hou)，根(gen)據(ju)每(mei)個(ge) DL- 氨基酸的(de)峰(feng)面(mian)積(ji)值(zhi)計算(suan) DL 體(ti)的(de)比(bi)例(li)，發(fa)現(xian)標(biao)記(ji)精(jing)確(que)到 1:1。 另外(wai)，確(que)認(ren)單(dan)獨反(fan)應的(de) D 型和 L 型氨基酸的(de)光(guang)學(xue)純度 (e.e) 時，所(suo)有(you)氨基酸的(de)光(guang)學(xue)純度均為 100％。

多肽標(biao)記(ji)反應

不僅(jin)氨基酸，短(duan)鏈(lian)肽也可以(yi)與(yu)氨基酸用(yong)相(xiang)同的(de)方(fang)式進行(xing)標(biao)記(ji)，而(er)不用(yong)管序列的(de)長(chang)度(du)或(huo)標(biao)記(ji)試劑(ji)的(de)結(jie)合(he)位(wei)點(dian)的(de)數(shu)量。

*1 βAla: β-丙-氨酸*2兩種標(biao)記(ji)劑與(yu)Lys賴(lai)氨酸側(ce)鏈(lian)的(de)氨基結合(he)

●定量表現(xian)

用該試(shi)劑(ji)盒標(biao)記(ji)的(de)不(bu)同濃度(du)的(de)氨基酸通(tong)過(guo) HPLC 分(fen)析(xi)。校(xiao)準(zhun)曲線(xian)在測試濃度(du)範(fan)圍內顯示出(chu)高度(du)線(xian)性(xing)。

其他應用數(shu)據(ju)

l                      4種Thr異構體(ti)的(de)分(fen)離(li)（HPLC/方(fang)法(fa)1）

l                      同時分(fen)離(li) C18 色(se)譜柱(zhu)難(nan)以(yi)分(fen)離(li)的(de)堿性(xing)化(hua)合物(wu)（LC-MS / 方(fang)法(fa) 1）

咪(mi)唑(zuo)二(er)肽的(de)分(fen)離(li)（HPLC/ 方(fang)法(fa) 1）

其他應用數(shu)據(ju)

● 運動(dong)飲(yin)料(liao)（方(fang)法(fa) 2 HPLC）

● MEM non-essential 氨基酸溶液(ye)（方(fang)法(fa) 1 LC/MS）

● 市售(shou)氨基酸飲(yin)料(liao)（方(fang)法(fa) 2 HPLC）

● 組胺(an)（方(fang)法(fa) 1 HPLC）

除氨基酸外(wai)，該產(chan)品(pin)還可(ke)用(yong)於其他胺(an)和(he)硫醇化(hua)合物(wu)。

訂購(gou)信息

專-利(li)產(chan)品(pin)

COSMOSIL / COSMOCORE 是(shi) Nacalai Tesque, Inc. 的(de)註(zhu)冊(ce)商標(biao)

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