PolyLC PolyPROPYLA色(se)譜柱是矽膠(jiao)基材(cai)料，可通(tong)過疏水(shui)相(xiang)互作用（HIC），HIC分離(li)蛋白(bai)的方法(fa)是基於蛋白(bai)質的疏水(shui)特(te)點(dian)，比如RPC。但(dan)是，HIC使用完(wan)-全含水(shui)的(de)緩沖器,保留(liu)住了蛋白(bai)質的三(san)級(ji)結構和(he)生物(wu)活性(xing)。這(zhe)種分離(li)性通(tong)常(chang)優(you)於RPC方(fang)法分離(li)蛋白(bai)質和(he)多(duo)肽(tai)，能夠(gou)極大(da)的(de)保留(liu)蛋白(bai)質的二(er)級(ji)結構和(he)三(san)級(ji)結構。

PolyPROPYLA色(se)譜柱是矽膠(jiao)基材(cai)料，可通(tong)過疏水(shui)相(xiang)互作用（HIC），HIC分離(li)蛋白(bai)的方法(fa)是基於蛋白(bai)質的疏水(shui)特(te)點(dian)，比如RPC。但(dan)是，HIC使用完(wan)-全含水(shui)的(de)緩沖器,保留(liu)住了蛋白(bai)質的三(san)級(ji)結構和(he)生物(wu)活性(xing)。這(zhe)種分離(li)性通(tong)常(chang)優(you)於RPC方(fang)法分離(li)蛋白(bai)質和(he)多(duo)肽(tai)，能夠(gou)極大(da)的(de)保留(liu)蛋白(bai)質的二(er)級(ji)結構和(he)三(san)級(ji)結構。通(tong)常(chang)情(qing)況(kuang)下,樣(yang)品使用硫(liu)酸鹽或(huo)磷酸鹽等(deng)鹽(yan)濃(nong)度降低(di)梯(ti)度洗脫，通(tong)過增加(jia)蛋白(bai)質表面(mian)疏水(shui)性(xing)將其(qi)洗(xi)脫。表面(mian)活性劑(ji)(例如丙(bing)磺(huang)酸；辛(xin)基糖苷)如果必(bi)要(yao)的(de)話(hua)可(ke)以(yi)被(bei)添加(jia)到(dao)流動相(xiang)的。PolyPROPYLA的(de)相(xiang)對疏水(shui)值為(wei)100。HIC比其(qi)他(ta)方(fang)法(fa)有(you)更(geng)大(da)的敏感(gan)性，尤(you)其(qi)是涉(she)及到(dao)非(fei)極性(xing)基(ji)團。HIC適用於(yu):

• 多(duo)維蛋白(bai)純化(hua)（建(jian)議順序(xu):離(li)子交(jiao)換-鹽(yan)梯(ti)度洗滌(di)分離(li)-HIC)。

• 多(duo)肽(tai)的(de)純(chun)化(hua)（比如毒(du)液(ye)、糖肽(tai)類(lei)）

• 表面(mian)抗體

• 質(zhi)量控制分析蛋白(bai)質的單壹(yi)殘基(ji)的(de)極性(xing)或(huo)者突變體的修飾(shi)位(wei)點(dian)。

大(da)於(yu)20KDa的蛋白(bai)質建(jian)議使用1000 -或(huo)1500-A的孔(kong)。其(qi)能力(li)可以與離(li)子交(jiao)換相(xiang)媲美(mei)。除(chu)非(fei)該蛋白(bai)是公-認(ren)的顯著疏水(shui)性(xing)，建(jian)議使用PolyPROPYL A。

HIC 的(de)問(wen)題：

1. 脫鹽：不(bu)幸(xing)的是，HIC 中使用的(de)鹽不(bu)可凍(dong)幹。它(ta)們可以使用色(se)譜法（空間排(pai)阻(zu)、反相(xiang)等）或(huo)透(tou)析(xi)從樣(yang)品中去(qu)除(chu)。

2. 基(ji)線：HIC 中使用的(de)顯著(zhe)鹽濃(nong)度梯(ti)度導(dao)致(zhi)流動相(xiang)的折(zhe)射(she)率發(fa)生巨大變化(hua)。這(zhe)可能會導(dao)致(zhi)基線出現人(ren)為(wei)峰(feng)。例如，當在 220 nm 處(chu)監(jian)測(ce)流出物(wu)時，使用硫(liu)酸銨梯(ti)度會產生壹(yi)個上(shang)升的基(ji)線，並具(ju)有較寬(kuan)的*大(da)值。根(gen)據使用的(de)鹽和(he)波長，可(ke)能會觀察(cha)到(dao)基(ji)線上升或(huo)下降(jiang)。該問(wen)題在(zai) 254nm 和(he) 280nm 處(chu)不(bu)太(tai)嚴(yan)重(zhong)。基線的變化(hua)對可(ke)以在線可靠檢(jian)測(ce)的(de)蛋白(bai)質量施加(jia)了(le)壹(yi)個下限(xian)。如果蛋白(bai)質或(huo)肽(tai)含有色(se)氨-酸，則通(tong)過監測(ce)熒(ying)光而(er)不(bu)是吸光度可以(yi)完(wan)-全消除(chu)該問(wen)題。

3. 變(bian)性(xing)：HIC促進(jin)三(san)級(ji)結構的保留(liu)，大部分蛋白(bai)質被(bei)回收(shou)，80-100%的(de)生物(wu)活性(xing)保留(liu)。但是，四元結構可能會受到(dao)影(ying)響(xiang)；使用的(de)高鹽(yan)濃(nong)度會導(dao)致(zhi)壹(yi)些(xie)含有亞(ya)基的蛋白(bai)質分解。這(zhe)種影(ying)響(xiang)通(tong)常(chang)與列(lie)無(wu)關，並且(qie)必須在(zai)每個單獨的情(qing)況(kuang)下進(jin)行(xing)評估(gu)。

4. 聚合(he)：壹(yi)般(ban)來(lai)說(shuo)，這(zhe)不(bu)是壹(yi)個大(da)問(wen)題。傾(qing)向於在(zai)溶液(ye)中(zhong)聚集的混合(he)物(wu)有時(shi)會從 HIC 柱中(zhong)以離(li)散峰(feng)形(xing)式洗脫。聚集通(tong)常(chang)涉(she)及疏水(shui)相(xiang)互作用，但(dan)似乎色譜柱填(tian)料的(de)疏水(shui)表面(mian)超過了單個蛋白(bai)質單體相(xiang)互結合的(de)趨勢。

規(gui)格(ge)

具(ju)有(you) 2µm 顆粒的色(se)譜柱 （孔(kong)徑(jing)選(xuan)項：-10、-15。其(qi)他(ta)可(ke)用：ASK）